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為保證吸光度測定的準確性,《中國藥典》對吸光度的測定有以下一些要求。
1.對溶劑的要求 供試品的吸光度通常是配成溶液后測定。所用溶劑除能充分溶解樣品、與樣品無相互作用、揮發(fā)性小外,在測定波長處的吸光度也應(yīng)符合要求。
2.空白對照校正 吸光度的測定實際上是透光率的測定,透過光強度的減弱不僅是供試品溶液的吸收所致,還與溶劑和容器的吸收等因素有關(guān)。因此測定吸光度時,均應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照進行校正,以扣除這些因素的影響。
3.測定波長的檢查 為保障測定的可靠性和準確性、減少測定誤差,吸光度的測定一般在最大吸收波長(Amax)處進行。測定時,為了核對供試品溶液吸收峰的位置是否正確,除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照,用1em的石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰波長4-2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度,或由儀器在規(guī)定的波長附近自動掃描測定,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確。
4.供試品溶液的濃度 供試品溶液濃度的選擇,應(yīng)使吸光度讀數(shù)在0.3~0.7之間為宜。因為,在此范圍內(nèi)吸光度測定的相對誤差較小。應(yīng)根據(jù)吸光度的范圍要求和藥物的吸收系數(shù),將供試品溶液配制為適宜的濃度。
5.儀器狹縫寬度的選擇
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